百里香酚对LPS诱导的子宫内膜上皮细胞炎性反应的抗炎作用及机制

百里香酚是一种单萜类化合物，抗炎作用是其多种药理活性之一。子宫内膜炎是病原微生物感染子宫内膜而引起的一种生殖系统疾病，给经济动物的治疗带来了巨大困难。然而，百里香酚对子宫内膜炎的抗炎作用及机制的报道相对较少。因此，本实验研究了百里香酚对LPS诱导的山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)炎性反应的抑制作用及机制，为子宫内膜炎的中草药治疗提供科学的理论参考。
1．百里香酚对gEECs增殖的影响。采用MTT法检钡,JJgEECs的活力，利用瑞氏吉姆萨染色法观察gEECs的形态结构变化，并通过LDH实验测定细胞膜的通透性。结果显示，百里香酚对gEECs的安全浓度为100¨g／mL，该浓度范围内药物对细胞的活力和形态结构无显著影响；大于该浓度的百里香酚可显著增大gEECs的膜通透性，造成细胞损伤，产生了细胞毒性。因此，选择浓度分别为100、50、25肛g／mL的百里香酚用于后续实验的研究。

2．百里香酚对LPS诱导gEECs的炎性因子分泌的影响。将实验分为三组：对照组(contr01)；炎性模型组(LPS)；LPs+百里香酚组。LPS添加浓度为5¨g／mL，百里香酚添加浓度分别为100、50、25肛g／mL。应用NO检测试剂盒检测百里香酚对LPS诱导的NO释放量的影响：利用ELISA检
测百里香酚对LPS诱导的炎性因子分泌的影响。结果显示，不同剂量的百里香酚能不同程度地抑f日IJLPS诱导的gEECsqbTNF—c【、IL—lB、IL一6、IL．10、PGE2、NO及MMP一2、MMP．9的分泌增加。结果表明，百里香酚对LPS诱导的gEECs炎性反应具有显著的抑制作用，且减轻了gEECs因过度的炎性反应造成的结构性损伤。

3．百里香酚对LPS诱导gEECs的TLR4／NF—r．B信号通路的影响。利用Real—Time PCR方法对细胞因子几．1B及TLR4信号通路相关节点蛋白CDl4、TLR4、TRIF(TICAM)和MyD88的基因表达量进行检测，同时采用RT—PCR方法+IWB方法检测7NF—rd3p65的基因和蛋白表达量。结果显示，不同剂量的百里香酚能不同程度地抑制LPS诱导gEECs的IL一1B、CDl4、TLR4和TRIF(TICAM)基因表达的上调，但对MyD88的基因表达无影响。另外，百里香酚下调了NF—r,Bp65的基因和蛋白表达水平。结果表明，百里香酚对LPS诱导的gEECs炎性反应的抑制作用可能与抑制TRjF依赖的TLR4／NF．n13信号传递途径的活化相关。

总之，百里香酚通过调节炎性因子的分泌发挥其抗炎活性。同时，百里香酚还可抑制TⅪF依赖的TLR4／NF．rJ3信号的传递途径，且对gEECs无显著毒活性，可作为治疗子宫内膜炎的候选药物。